揚州水產運輸聯盟

取樣那點事

歐易生物2020-01-19 15:01:11

進行生物分子實驗最初的一步就是取樣,取樣的好壞直接決定了后續實驗是否可以開展。

然而就是這最初的一步就成為很多生物學研究著最為糟心的經歷,特別是準備嬌貴的RNA抽提所需樣品。

你是否也曾在取樣上栽過跟頭?你是否也曾反復的抽提失敗而苦惱不已?如果是這樣就來看看這篇小短文吧,或許你苦心準備數月甚至數年的樣品就能一次抽提合格。


1

取樣的基本原則

1、快速原則:在樣本的采集、貯藏、運輸過程中在允許的范圍內要做到盡可能快速,越多的準備時間越會提高樣品降解的可能。


2、低溫原則:當樣品脫離了活體后需要立刻投入液氮速凍,凍存徹底后放入-80℃保存,并采用干冰運輸。


3、無污染原則:取樣所用的器材試劑等需保證無外源性RNA酶污染。


4、生物學意義原則:采集的樣品要有研究的代表性,采集時要只采集所需研究的樣本,不要摻雜有與實驗無關的組織在樣品中,防止后續產生無效數據干擾實驗結論。


5、少量多次原則:當樣本量較大較多時,盡量做到分多管取樣,謹防發生單管樣品量過多的情況。樣品個數多時,在允許的情況下做到分批處理,防止整個取樣時間過長導致最早處理好的樣品發生降解的情況。


6、清晰一致原則:取樣時樣本的編號要清晰無涂改,編號的記錄和規格盡量保持一致

以上為取樣的基本原則,除開一些特別處理的樣本,絕大多數的樣本取樣過程都以滿足以上基本原則為準。

2

樣品采用RNAlater類保存液貯存及運輸的注意事項

RNAlater保存液是一種無毒的且能滲透入組織內,抑制組織中內源性RNA酶的一種液體,用RNAlater保存的樣品可以在4℃情況下進行運輸,同時在4℃情況下放置很長時間也不會降解。因它的這種作用,使得其成為取樣時被大量生物學研究者所熱衷使用的一種選擇。

1、放入RNAlater的組織不能過大,因為組織較大的情況下,RNAlater很難完全滲透入組織內部,這樣會導致組織內部發生降解的情況。為避免這類情況的發生,可以在放入前先將組織剪碎處理,同時需保證RNAlater完全浸沒組織,這里推薦RNAlater基本裝滿凍存管,同時也不能完全裝滿因為RNAlater凍存為固態時體積會增大,容易對凍存管造成破損。


2、RNAlater不宜對細胞和植物組織進行保存,前者可能難以將細胞與RNAlater分離(RNAlater會抑制裂解液對樣品的裂解效果),后者因存在細胞壁,RNAlater難以滲透入組織的細胞中。

3

樣品采用TRIZOL或其他抽提試劑盒裂解液保存

因為TRIZOL和抽提試劑盒裂解液本身在裂解的同時還會抑制樣品內源性RNA酶的作用,使得樣品不易發生降解的情況,該方法目前也是常用的一種取樣后保存和運輸的方案。但通過大量的實驗,目前只能保證細胞沉淀放入TRIZOL保存后質量很好,組織放入其中后凍存運輸得到的結果有好有壞,這里更推薦用液氮速凍干冰運輸的常規方法取樣,結果更為穩定。

4

植物類樣品取樣

植物類樣品采集一律是新鮮采集植物組織,液氮速凍后,用錫箔紙包裹后干冰寄送(錫箔紙上編號要清晰可辯,不要用手捏實錫箔紙,可以輕微壓平。取樣時保證組織的完整性,不推薦送研磨處理后的植物樣品。

5

細胞類樣品取樣處理及運輸

1、采集前先對細胞量進行計數,常規抽提的細胞量推薦在10^6至10^7,一些分選細胞或者原代細胞等無法得到較多細胞量的樣品推薦后續加入一些抽提微量細胞的抽提試劑盒的裂解液(這里推薦采用QIAGEN公司的74004試劑盒裂解液,不推薦采用TRIZOL裂解)。


2、對于帶有液體培養基的細胞樣品,如果為貼壁細胞則緩緩將培養液倒掉,加入裂解液后反復吹打。


3、如果是帶培養液的細胞樣本在運輸時不得凍存,不然細胞會發生破裂,導致內源性RNA酶釋放,抽提得到的RNA就會發生降解。

6

血液樣品處理

1、有的公司會有專門的抽提全血的試劑盒,可以按相關的說明書進行操作。


2、對于用抗凝管裝的全血樣品,不得凍存,需用碎冰運輸,在2小時內(最佳處理時間),不超過24小時的時間段里進行分離處理。

以上為常規樣品的取樣要求和注意事項,最后祝每位科研工作者能得到自己想要的科研數據和成果。


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張晨暉??撰文

本文系歐易生物原創

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