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【技術】瘦肉精膠體金快速檢測法

四川畜牧獸醫2020-01-17 16:22:48

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??瘦肉精是指在飼料和畜牧生產中,國家禁止使用的β-腎上腺素受體激動劑類化合物,包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇等十幾種物質。 瘦肉精屬于非蛋白質激素,使用后會在豬體中形成殘留,尤其是在豬的肝臟等內臟器官形成高殘留,進而危害人體健康。

? ? 瘦肉精主要導致人出現肌肉震顫、心慌、戰栗、頭疼、惡心、嘔吐等癥狀,對高血壓、心臟病、甲亢和前列腺肥大患者的危害更大,嚴重時可致人死亡。


1 ?瘦肉精檢測樣本

1.1 ?采集人員 ?

? ?樣品由不少于2人的檢測單位人員采集。采集樣品后,采集人員應填寫采樣單。

1.2 ?采集比例 ?

? 飼喂不同品牌、批次飼料的豬(牛、羊)2~3頭;運輸的豬(牛、羊)每批次(同一車、船運輸的)50頭以上的不少于3%的抽樣,50頭以下的抽樣1~2頭;屠宰場同一批豬(牛、羊)50頭以下的,至少抽檢1頭,50頭以上的,不少于3%的抽樣。豬(牛、羊)來自多個養殖場(戶)的,抽樣樣品應涵蓋每個場(戶),每個場(戶)抽檢數量不少于1頭。

1.3 ?樣品液制備

1.3.1 ?尿樣 ??

? 用干燥、潔凈的離心管或適當容器采集50 mL左右被檢畜尿液作樣品。如不立即進行檢測,尿樣在2~8 ℃條件下可保存24 h,保存樣品時要避免受污染。

1.3.2 ?組織樣本 ?

? 組織樣本(包括被檢畜的瘦肉、肝臟、肺臟和腎臟)應立即檢測或收集在塑料袋中及時送檢。若不能及時檢測,樣本在2~8 ℃條件下可保存24 h,-20 ℃冷凍條件下可保存一周,冷凍時忌反復凍融。

? ? 檢測前,組織樣本應剪碎,并稱取1 g裝入離心管中,加1 mL提取液后蓋緊管蓋,放入沸水中加熱10~15 min,然后取出離心管靜置至室溫,再移出上清液作樣品液備用。

1.3.3 ?飼料樣本 ??

? 研碎飼料,稱取1 g放入5 mL離心管,然后加入2 mL去離子水充分混勻,5 min后,用濾紙過濾液體(如上清液仍然渾濁,則用5 000~10 000 r/min離心5 min),再移出上清液作樣品液備用。

1.4 ?樣品分裝保存 ?

? 現場檢測為陰性的,樣品不需留樣。需要進行確證的檢測樣品或風險檢測樣品,應分裝、封存后送檢和保存,分裝樣品分作三份,按檢測用樣、檢測單位留樣、被抽檢單位留樣進行標記,并粘貼加蓋檢測單位印鑒的封條,所有樣品的編號應當與被檢畜的耳標號對應。樣品運輸、保存應在低溫條件下進行,長期保存的應在-20 ℃以下凍存。


2 ?檢測項目

? ? 檢測被檢畜尿樣、組織和飼料中的鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇殘留。


3 ?檢測卡質量要求

? ? 瘦肉精膠體金檢測卡的靈敏度、穩定性、交叉反應等參數應符合相關要求;假陽性率應不高于5%,假陰性率為零;鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺檢測限應不高于3 μg/L,沙丁胺醇檢測限應不高于5 μg/L。


4 ?檢測原理

? ? 瘦肉精膠體金檢測卡應用了競爭抑制免疫層析的原理,檢測時樣本中的瘦肉精在流動的過程中與膠體金(或膠體硒)標記的特異性單克隆抗體結合,抑制了抗體和NC膜檢測線上瘦肉精-蛋白偶聯物的結合。如果樣本滲出液中瘦肉精含量大于3 ng/mL,檢測線不顯色,則結果為陽性,若檢測線顯紅色,則結果為陰性。


5 ?操作步驟

5.1 ?待檢樣品液恢復至室溫。

5.2 ?將檢測卡平放,用滴管吸取待檢樣品液2~3滴垂直加于加樣孔后,開始計時。

5.3 ?3~5 min后根據示意圖判定檢測結果,30 min之后結果判定無效。


6 ?結果判定?

6.1 ?陰性(-) ?

? 兩條紫紅色帶出現表示樣品中鹽酸克倫特羅低于3 ng/mL、萊克多巴胺低于3 ng/mL、沙丁胺醇低于5 ng/mL,或不含有。

6.2 ?陽性(+) ?

? 檢測T線無顯色表示樣品中鹽酸克倫特羅高于3 ng/mL、萊克多巴胺高于3 ng/mL、沙丁胺醇高于5 ng/mL。

6.3 ?無效 ?

? 未出現質控線C線,表明操作不正確或檢測卡已失效。


7 ?檢測注意事項

? ? 檢測卡應在打開1 h內使用;檢測時避免陽光直射和空調直吹;如果尿樣和組織提取樣本出現沉淀或渾濁物,應離心后再檢測;不潔尿樣(如含有漂白劑、明礬等)可能導致產生錯誤結果,其應離心后再檢測。

? ? 自來水、蒸餾水或去離子水不能作陰性對照;金標卡儲存于陰涼的干燥處,切勿冷凍,其有效期為18個月。


8 ?處理

8.1 ?檢測陰性 ?

? 檢測結果為陰性的,所檢測的豬(牛、羊)、豬(牛、羊)產品、飼料中不含瘦肉精,可按要求飼養、運輸、屠宰或銷售。

8.2 ?檢測陽性 ?

? 檢測結果為陽性或疑似陽性的,應立即進行二次快速檢測,如二次快速檢測結果為陽性,應立即禁止同批豬(牛、羊)、同批豬(牛、羊)產品、飼料移動或對其進行封存,同時應向當地畜牧獸醫主管部門報告,并及時采樣進行確證檢測。

? ? 如二次快速檢測結果為陰性的,需進行第三次快速檢測,若檢測結果為陰性,應按陰性結果處理,檢測結果為陽性的,按陽性結果處理。

8.3 ?確證陰性?

? ?確證檢測結果為陰性的,檢測機構應出具確證檢測報告,并及時告知送樣單位。

8.4 ?確證陽性 ?

? 確證檢測結果為陽性的,送樣單位在收到確證檢測結果24 h內,應書面向當地畜牧獸醫主管部門報告,同時告知被抽樣單位。當地畜牧獸醫主管部門應根據報告及時查處違法單位,并通報公安機關。

9 ?快速檢測方法比較

? ? 瘦肉精膠體金檢測卡用于定性被檢畜尿液(如豬尿、牛尿、羊尿等)中的鹽酸克倫特羅殘留,整個檢測只需要5~10 min左右,其靈敏度為3 ng/mL。采用該檢測卡進行檢測快速方便,適用于屠宰場、農貿市場、超市等現場快速檢測。

? ? 采用瘦肉精ELISA試劑盒可檢測被檢畜尿、肌肉、肝臟及飼料中的鹽酸克倫特羅。該試劑盒可同時用于處理96個樣品,操作時間少于45 min,靈敏度為0.025~0.1 ng/mL,其相對于膠體金檢測卡檢測結果更準確,適用于實驗室快速檢測?!觯ū疚淖髡邌挝唬核拇ㄊI山縣淥井鎮畜牧獸醫管理站)

原文刊載于《四川畜牧獸醫》2017第9期P37


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